MiRNA全稱是MicroRNA,也就是微小RNA,要證明其可以通過HK2基因從而影響到HK2蛋白的表達,就需要進行證明。
要知道,HK2是細胞獲得能量的關鍵,也是葡萄糖能夠被細胞利用產生能量的第一個步驟的關鍵酶。
大致的實驗流程,大概可以分成以下幾步。
第一步就是構建過表達MiRNA143的細胞系,也就是將含有大量MiRNA143的基因片段,轉入到骨腫瘤細胞中,使得其MiRNA143量增加,假如其可以阻斷HK2的活性,那么骨肉瘤細胞必然會存在能量供應不足的情況。
沒有能量供應的骨肉瘤細胞必將會像是不吃飯的人一樣,連基本的生存的都成了問題,怎么去造人?
哦不,是造細胞。
假如其可以促進HK2的活性,那么骨肉瘤細胞必然會存在能量供應充足,有了能量的情況下,那就相當于磕了“萬艾可”,遍地撒種子,通宵打蛋完全不在話下,無限擴展,無限囂張,到處而是二代……
同時,也要構建Si-MiRNA143的細胞系。SIRNA的全稱是SmallinterferingRNA,也就是小干擾RNA,之所以有SIRNA這個名字就是它最先發現的人是外國人,母語是英文。
否則的話,它可能全稱就變成了‘xiaoganraoRNA’,縮寫可以寫成XGRRNA。
這種干擾RNA的作用,也就是把腫瘤細胞中的小RNA的表達給阻滯掉,使得其少表達甚至是不表達。
這樣就形成了和過表達小干擾RNA143相反的作用,這是對照組之一。
還有就必須要做空白的對照,那就是不做處理的骨肉瘤細胞,叫空白對照。
觀察以上處理組和觀察組的骨肉瘤細胞的生長情況,分別于對照組和空白對照組作一個對比,使得明眼人就能夠看得出來他們之間的差異,從而佐證小干擾RNA143在腫瘤中的作用。
這是實驗設計的情況。
再接下來,會通過測定其中葡萄糖和乳酸的含量,來初步檢測各個組中骨腫瘤的活性。
因為葡萄糖必然是所有細胞能量代謝的基礎,在培養瓶里,一定容積的葡萄糖是有限且等量的,消耗的多的,那么這個組的活性就越強,消耗越少的,活性就越弱。
而乳酸,則是葡萄糖通過了能量代謝之后的一個產物,產物越多,代表活性就越強,產物越少,活性越弱。
只要搞清楚這些原理,其實實驗結果一展示出來,只要是個會認字的人就能夠看懂。
科研并不是高大上的,讓人不懂的,反而,每一個成果最終的展示,最好的目的就是能夠讓傻瓜都知道它的結果是這樣子的,本質是揭秘……
……
搞清楚了這些之后,陸成就開始著手轉染骨肉瘤細胞制作細胞系了。
過表達細胞系和沉默組細胞系雖然都會用到轉染的步驟,但是轉染的載體的選擇,也是有一定細微的差異的……
陸成把準備工作都做好了之后,實驗室里的一個學姐就看到了,然后問陸成說:“親愛的陸,聽說你現在是在做轉染?”
陸成正在消毒操作所需的器械,聽到就轉頭,看清楚來人正是凱瑟琳師姐,也是一個博士,傳聞中實驗室第二好看,第一車燈的那個美女師姐。