青霉素過敏試驗包括皮膚試驗方法，簡稱青霉素皮試，及體外試驗方法，其中以皮內注射較準確。
皮試本身也有一定的危險性，約有25%的過敏性休克死亡的病人死于皮試。
所以皮試或注射給藥時都應作好充分的搶救準備。
在換用不同批號青霉素時，也需重作皮試。
干粉劑可保存多年不失效，但注射液、皮試液均不穩定，以新鮮配制為佳。
而且對于自腎排泄，腎功能不良者，劑量應適當調整。
此外，局部應用致敏機會多，且細菌易產生抗藥性，故不提倡。
青霉素用于臨床是40年代初，人們對青霉素進行大量研究后又發現一些青霉素，當人們又對青霉素進行化學改造，得到了一些有效的半合成青霉素。
70年代又從微生物代謝物中發現了一些母核與青霉素相似也含有β－內酰胺環，而不具有四氫噻唑環結構的青霉素類，可分為三代：第一代青霉素指天然青霉素，如青霉素G（芐青霉素）；第二代青霉素是指以青霉素母核－6－氨基青霉烷酸（6－APA），改變側鏈而得到半合成青霉素，如甲氧苯青霉素、羧芐青霉素、氨芐青霉素；第三代青霉素是母核結構帶有與青霉素相同的β－內酰胺環，但不具有四氫噻唑環，如硫霉素、奴卡霉素。
青霉素G類：如青霉素G鉀、青霉素G鈉、長效西林`青霉素G、peillinG、盤尼西林、配尼西林、青霉素鈉、芐青霉素鈉、青霉素鉀、芐青霉素鉀等。
青霉素V類：（別名：苯氧甲基青霉素、6-苯氧乙酰胺基青霉烷酸）如青霉素V鉀等（包括有多種劑型）。
耐酶青霉素：如苯唑青霉素（新青Ⅱ號）、氯唑青霉素等。
氨芐西林類：如氨芐西林、阿莫西林等。
抗假單胞菌青霉素：如羧芐西林、哌拉西林、替卡西林等。
美西林及其酯匹西林：如美西林及其酯匹美西林等，其特點為較耐酶，對某些陰性桿菌（如大腸、克雷伯氏和沙門氏菌）有效，但對綠膿桿菌效差。
甲氧西林類：如坦莫西林等。
天然青霉素與半合成青霉素生產方法完全不同。
天然青霉素，青霉素G生產可分為菌種發酵和提取精制兩個步驟。
菌種發酵，將產黃青霉菌接種到固體培養基上，在25℃下培養7～10天，即可得青霉菌孢子培養物。
用無菌水將孢子制成懸浮液接種到種子罐內已滅菌的培養基中，通入無菌空氣、攪拌，在27℃下培養24～28h，然后將種子培養液接種到發酵罐已滅菌的含有苯乙酸前體的培養基中，通入無菌空氣，攪拌，在27℃下培養7天。
在發酵過程中需補入苯乙酸前體及適量的培養基。
提取精制，將青霉素發酵液冷卻，過濾。
濾液在pH2～2.5的條件下，于萃取機內用醋酸丁酯進行多級逆流萃取，得到丁酯萃取液，轉入pH7.0～7.2的緩沖液中，然后再轉入丁酯中，將此丁酯萃取液經活性炭脫色，加入成鹽劑，經共沸蒸餾即可得青霉素G鉀鹽。
青霉素G鈉鹽是將青霉素G鉀鹽通過離子交換樹脂（鈉型）而制得。
半合成青霉素，以6APA為中間體與多種化學合成有機酸進行酰化反應，可制得各種類型的半合成青霉素。
6APA是利用微生物產生的青霉素酰化酶裂解青霉素G或V而得到。酶反應一般在40～50℃、pH8～10的條件下進行；酶固相化技術已應用于6APA生產，簡化了裂解工藝過程。
6APA也可從青霉素G用化學法來裂解制得，但成本較高。
側鏈的引入系將相應的有機酸先用氯化劑制成酰氯，然后根據酰氯的穩定性在水或有機溶劑中，以無機或有機堿為縮合劑，與6APA進行酰化反應。
縮合反應也可以在裂解液中直接進行而不需分離出6APA。