“在超凈工作臺內用高壓滅菌好的手術剪將小鼠胸腔左下側開一個小口,用鑷子摘取脾臟后放于含3~5ml不完全培養基的皿中,剔除周圍結締組織,將脾臟轉移至潤濕的0.4目篩網中用研磨棒輕柔研磨,加入適量預冷的不完.”
原來胡嘉然挺高興的,但沒想到在融合的時候遇到了麻煩。
高風給的實驗流程中是要將骨髓瘤細胞和免疫鼠脾細胞進行融合,可他們進行了多次的實驗,結果均以失敗告終。
“我感覺是比例的問題。”岳鵬輝說道,“兩種細胞的比例在融合的時候起著很關鍵的作用。”
“還有溫度!”一個叫王偉的說道,他是研究生學歷,基本功很扎實,胡嘉然早就注意到了這個人。
“還有攪拌的速率。”剛來不到1個月的徐兵也發表了意見,“過快的攪拌速率會導致脾細胞破裂,太慢的話又容易凝固,我覺得速度為25r/min最為合適。”
眾人都七嘴八舌的說了起來,實驗到這個地方卡住了,都1周多了,一點進度也沒有,大家都很著急。
“說的都挺有道理。”胡嘉然做了總結,“那接下來該怎么辦呢?”
“能怎么干啊?往死里干唄。”王亮喊了起來,“四點睡,六點起,閻王夸我好身體!”
胡嘉然突然對這個逗比滿意極了,“加班費發雙倍的。”他同時使出了無堅不摧的鈔能力。
半月后.
“這兩天放假,大家好好歇歇。”胡嘉然很興奮,但聲音中明顯透露著一股子虛弱。
他強打精神,開始把實驗的詳細流程給記錄了下來:
充分打散沉淀,將1ml經過32c預熱的50%peg勻速加入離心管中(用1ml的移液器,5min內加完),期間用移液器槍頭輕柔攪拌;
持續緩慢的用槍頭攪拌3~4分鐘;
勻速加入1ml經過37c預熱的不完全培養基(1min內加完),期間用移液器槍頭輕柔攪拌;
再勻速加入3ml經過37c預熱的培養基(3min內加完),期間用移液器槍頭輕柔攪拌;
融合后24小時內補加含hat的選擇性補液培養基,50μl/well;
補液兩天后進行第一次半換液,每孔吸出60~80μl的培養基,第一次半換液培養基內hat含量減半,50μl/well;
再過兩天后進行第二次半換液,每孔吸出60~80μl培養基,換成含ht的培養基,50μl/well。
“你要不歇歇再弄吧。”齊楠楠在一旁勸道,“我這段時間真怕你猝死了。”
“怎么可能?”胡嘉然頭都沒有抬,“我虎著呢。還有,齊楠楠,我能不能給你提個建議啊?”
“你說。”
“就是你處死小白鼠的時候,能不能不要老是露出那種變態的笑容啊?”他嫌棄道,“連王亮那么變態的人都說你不正常。”