這一步底層科研民工都能做到,對團隊自然毫無壓力。
基因改造這一步要先選擇合適的逆轉錄病毒或其他病毒載體,高風選的是γ-逆轉錄病毒,別問為什么,問了就是突發奇想。
“那用什么方法將編碼car蛋白序列的外源基因轉入t細胞中呢?”鞏博士問道,這一步明顯是最大的難點,他和幾人琢磨了很久,現在還沒有頭緒。
“是不是可以用電離傳導方法呢?”趙康出聲道,“之前我參與過一個項目,他們就是采用的這個方法,就是成功率不怎么高。”
事實上成功率不是不高,而是特別低,那個項目最終流產了,出資方賠的哇哇叫。
“用電穿孔法吧。”胡嘉然說道,“我們把電壓設置到.”
“成功了!”鞏博士大喊一聲道,他有一點激動,剩下的全是不知所措。
說好的難點呢?就這?
“讓我看一下!”胡嘉然立馬把他擠到了一邊。
“快!趕緊驗證一下現在的t細胞能不能表達car!”
驗證的結果讓人非常滿意,這意味著研發流程往前進了一大步。
接著就是激活和擴增步驟,在添加適當的共刺激分子如cd3/cd28后,使用免疫磁珠系統刺激t細胞,并通過表達共刺激配體的細胞來誘導t細胞的大量增殖。
“可我們不會這個免疫磁珠系統啊。”胡嘉然跑著去找高風。
免疫磁珠的原理是運用核-殼的合成方法合成含有超順磁性物質的高分子表面覆蓋的復合材料、穩定性好、能進行后期標記的物質。
利用這些物質表面的功能集團如氨基、羧基、巰基等進行抗體的共價或者非共價偶聯,可用于結合相應的抗原或抗體,這樣在外加磁場的吸引下可做定向移動,從而達到分離,檢測,純化基因、蛋白質、細胞、微生物等的目的。
聽著很簡單,但做起來很難的,國內就沒幾個這方面的人才。
“沒那么難,我給你講步驟,你來動手。”高風對胡嘉然說道,后者一臉的無語。
“風哥,我可只是本科學歷啊。”他善意的提醒道。
“這個就是熟能生巧。”高風解釋道,“就是博士,前期做的時候也得一步一步熟悉。”
他在空間里面肝了好久了,只成功過一次,但就是對胡嘉然有一種莫名的信心。
這孩子手巧!
“首先呢,我們要進入細胞懸液制備,組織——裂紅——細胞計數——nave細胞——重懸.”
胡嘉然皺起了眉頭。
“其次我們要進入磁珠孵育流程,磁珠組分——移液——吹打——磁極使用——收集.”
胡嘉然臉色變得蒼白。
“然后就是流式分析流程,克隆號選擇——去死活——圈門邏輯”
胡嘉然腦門上全是汗,只覺得一陣惡心。
“壞了,我對這些高大上的知識過敏!”他心想道。</p>