免疫熒光染色!
這個實驗步驟的結果,將掲示最終的答案。
若是結合,那彭月嬌的怪病,或許有了新的轉機。
但如果沒有發生結合……恐怕所有人都會再次茫然,研究也將陷入新的怪圈之中!
此刻,即便是莫雷蒂,心情都有些緊張了。
而許秋則依舊平靜。
并且,熒光染色的步驟,也經過了他的改良。
相比于常規的“單張玻片僅包被一種抗原”做法,許秋采取的方案,是用聚賴氨酸包被玻片用疏水筆劃分三區,三區分別包被活菌、熱滅活菌以及1%tritonx-100裂解菌。
這種做法的優勢很大。
一來,可以消除玻片表面性質差異導致的結合偏差。
二則是能夠同時展示抗原構象變化對結合的影響。
從活菌,到熱滅活菌,再到利用去污劑tritonx-100裂解細胞組織獲得蛋白的裂解菌液……
說得直白一點,活菌就是全活,熱滅活菌就是活一半,而裂解菌則是全死……后者的作用,是用于確定結合只發生在熱滅活菌暴露的抗原表位之上。
而且在進行熒光標記時,許秋也微調了所用材料。
此前,他們用的是fitc標記。
它激發488nm,很容易與組織自發熒光混淆。
畢竟生物樣本中最常見的自發熒光就是綠色,與fitc標記高度重合,很容易認錯。
而許秋,則換成了alexafluor594標記。
這種標記,激發在590nm,而且顏色為紅色!
幾乎不會與自發熒光混淆!
“太細節了……”
“連熒光的激發與自發熒光混淆都考慮到了?”
“我之前一直用的fitc標記,有幾次碰到的熒光反應很強烈,還以為是出成果了,后來才發現是樣本中的脂褐素自己在發光……給我白高興一場!”
“換用alexafluor594,則能完全避免這個問題!”
莫雷蒂等人驚嘆不已。
而邱偉、張驍等科研人員,則是更加振奮。
這便是他們不愿意錯過許秋的實操研究的原因了。
許秋的手術堪稱完美。
而他做研究,也講究精雕細琢。
很多細節上的處理,都極為巧妙。
作為科研人員的他們,看得爽是一回事,另外的關鍵在于——他們也能借此得到感悟,將同樣的手法用在往后的科研之中!
這才是最大的裨益!
……
而在眾人目不轉睛的注視之中,實驗終于到了最后階段。
熒光染色完成。
接著,是用imagej量化熒光強度,通過對比roi內平均像素值,比較三個區域的結合差異。
所有人都緊張起來。
就連莫雷蒂,都有種手心冒汗的感覺!
這個結果,將決定今晚的努力是否白費了。
許秋的動作卻很快。
他直接就開始對比三個區域。
當看到結果時,所有人的眼睛都瞪大了。
活菌區,依舊呈現出微弱非特異性熒光,且平均強度小于15au。
而1%tritonx-100裂解菌區域,則完全無熒光,意味著無結合。
而中心區域,熱滅活菌區,強烈的熒光信號仿佛是一輪誕生于載玻片上的太陽,極其醒目,且平均強度甚至達到了182au!
足可見結合之激烈!